藥品微生物檢測(cè)項(xiàng)目是藥品質(zhì)量控制的重要組成部分,影響藥品微生物檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素有很多,人員、儀器設(shè)備、使

用的試劑/培養(yǎng)基/菌種、檢測(cè)方法、檢測(cè)環(huán)境等,本文主要針對(duì)藥品微生物的檢驗(yàn)過程中,對(duì)影響檢測(cè)準(zhǔn)確性的相關(guān)因素展開討論

分析,建立科學(xué)合理的質(zhì)量控制程序,避免由于檢測(cè)誤差而造成藥品的不正確評(píng)價(jià)

1 前言

藥品質(zhì)量直接關(guān)系到人民用藥的安全性和有效性, 而藥品在生產(chǎn)過程中易受微生物的污染, 對(duì)微生物的控制和檢測(cè), 是藥品生產(chǎn)過程中重要的環(huán)節(jié), 良好的微生物檢測(cè)能夠客觀準(zhǔn)確反映出藥品中各種微生物的含量, 藥品是否已經(jīng)受到微生物的污染。

2 藥品中微生物的特點(diǎn)及檢測(cè)意義

藥品中微生物污染的不均一, 且又具有可變性, 使得客觀呈現(xiàn)產(chǎn)品的真實(shí)情況變得困難, 給檢測(cè)工作帶來更高的挑戰(zhàn)；同時(shí), 檢測(cè)過程對(duì)微生物有著重大的影響, 鑒于這些原因, 獲得微生物的準(zhǔn)確結(jié)果, 控制藥品微生物檢測(cè)過程中的影響因素變得尤為重要。

如果藥品受到微生物的污染, 產(chǎn)生有害代謝產(chǎn)物, 引起藥品的變質(zhì), 造成人體感染、中毒或致敏反應(yīng), 嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成患者的生命安全, 同時(shí)也會(huì)給藥品的生產(chǎn)造成極大阻力, 企業(yè)名聲受損, 不利于藥品企業(yè)發(fā)展。因此, 對(duì)藥品微生物進(jìn)行準(zhǔn)確科學(xué)地檢測(cè)是至關(guān)重要的。

3 影響藥品微生物檢測(cè)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素

3.1樣品

選擇專業(yè)科學(xué)的抽樣方案是微生物檢測(cè)的基礎(chǔ), 抽取的樣品應(yīng)能夠反映整體樣本的實(shí)際情況。因產(chǎn)品中受微生物污染的不均一性, 故抽樣方案應(yīng)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估, 要保證取得的樣品包含微生物污染風(fēng)險(xiǎn)大的產(chǎn)品, 如進(jìn)行無菌檢測(cè)的樣品, 應(yīng)包括無菌灌裝的初和終的樣品, 以降低產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)；取樣過程也是易被微生物污染的過程,防止取樣過程中的污染和交叉污染, 取樣環(huán)境應(yīng)得到控制, 接觸藥品的取樣工具、樣品容器等應(yīng)經(jīng)過滅菌處理；樣品在儲(chǔ)存過程中, 也能改變微生物的活性, 應(yīng)在適宜的條件存放。總之, 采集到有代表性的樣品是檢測(cè)準(zhǔn)確性的前題。

3.2 培養(yǎng)基

檢測(cè)微生物為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)之一是培養(yǎng)基制備, 培養(yǎng)基是微生物生長的營養(yǎng)物, 培養(yǎng)基的性能與檢測(cè)結(jié)果直接相關(guān)。每種微生物生長繁殖都有適宜成份和pH 值, 培養(yǎng)基成份和pH 值的改變直接影響微生物的存活。在配制培養(yǎng)基時(shí), 應(yīng)用稀鹽酸或稀氫氧化鈉小心地調(diào)節(jié)pH 值, 使滅菌后的pH 在要求范圍內(nèi)。

培養(yǎng)基滅菌結(jié)束, 應(yīng)馬上從滅菌柜中取出, 避免培養(yǎng)基焦化而顏色變深；使用培養(yǎng)基時(shí), 不能直接用電爐加熱融化, 也不能多次加熱融化, 培養(yǎng)基中的氨基酸、糖分等營養(yǎng)成份會(huì)被破壞, 影響培養(yǎng)基的質(zhì)量, 會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成21% 的誤差；培養(yǎng)基在貯存過程中應(yīng)防止水分流失, 瓊脂培養(yǎng)基不能在低于0℃的條件下保存, 影響凝膠特性；

培養(yǎng)基的注皿量為十五毫升左右, 厚度為四毫米, 不易過薄過厚, 太薄容易造成水分流失, 太厚會(huì)造成培養(yǎng)基中氧含量不足, 抑制需氧菌的生長。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)菌株

微生物檢測(cè)時(shí), 使用的對(duì)照菌株必須選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株, 且可溯源至國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)室在保存和使用過程中, 應(yīng)觀察標(biāo)準(zhǔn)菌株是否出現(xiàn)形態(tài)變異、耐藥性變異等, 應(yīng)減少污染和保持菌種的生物特征穩(wěn)定典型。藥品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中常用的對(duì)照菌為無芽孢桿菌, 存活時(shí)間較短, 用生理鹽水- 蛋白胨緩沖液配置不同濃度的菌液,菌株在三天之后活菌數(shù)量會(huì)下降40%, 五天之后下降70%, 故規(guī)范、統(tǒng)一的操作程序來控制菌株制備和使用是微生物檢測(cè)結(jié)果一致性的重要保證。

3.4 供試液制備

供試液勻質(zhì)方式和條件在很大程度上會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果, 供試液中如果有菌, 則分散充分之后菌落生產(chǎn)數(shù)就更多。此外, 供試液分散度不同還會(huì)影響供試液的pH 值, 從而影響微生物的生長, 造成實(shí)驗(yàn)測(cè)試結(jié)果偏差。應(yīng)用合理的方法進(jìn)行供試液的制備, 保證供試液均勻分散, 且不改變樣品中原有微生物數(shù)量和種類, 這是供試液制備的先決條件。

3.5 結(jié)果觀察與計(jì)數(shù)

藥品微生物檢測(cè)時(shí)如果細(xì)菌生長的小且密集, 則容易出現(xiàn)肉眼偏差, 計(jì)數(shù)發(fā)生失誤。在菌落計(jì)數(shù)過程中, 可以適當(dāng)借助低倍顯微鏡或者放大鏡來觀察, 避免將小氣泡、培養(yǎng)基沉淀物以及藥渣當(dāng)做菌落給計(jì)數(shù)上去。計(jì)數(shù)過程需要小心謹(jǐn)慎, 如果難以區(qū)別, 可以按照實(shí)際情況適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間, 在菌落生長的更大、更明晰之后再行觀察和計(jì)數(shù)。

3.6 人員資質(zhì)

藥品微生物檢測(cè)的整個(gè)操作過程, 必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。現(xiàn)如今, 檢測(cè)人員專業(yè)素質(zhì)不高, 不能正確進(jìn)行結(jié)果觀察和判斷, 是藥品微生物檢測(cè)的大風(fēng)險(xiǎn)。微生物檢測(cè)人員應(yīng)選擇有專業(yè)背景, 受過相關(guān)專業(yè)知識(shí)培訓(xùn), 特別在潔凈更衣、清潔消毒、培養(yǎng)基制備、鏡檢、菌種傳代、菌落計(jì)數(shù)和結(jié)果判斷等操作步驟上, 需要對(duì)檢測(cè)人員進(jìn)行實(shí)操培訓(xùn)及資質(zhì)確認(rèn), 在具備微生物檢測(cè)能力后, 才可上崗操作。

3.7 環(huán)境控制

在藥品的微生物檢測(cè)中, 先進(jìn)的硬件設(shè)施及的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境是檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的保障。因此, 應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境設(shè)施的建設(shè), 注意人流物流及檢測(cè)流程的順暢, 避免潔凈物品與培養(yǎng)廢棄物的交叉。潔凈級(jí)別滿足檢測(cè)要求,陽性實(shí)驗(yàn)室的空調(diào)系統(tǒng)獨(dú)立設(shè)計(jì), 定期對(duì)潔凈環(huán)境進(jìn)行懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及溫濕度、壓差等監(jiān)測(cè), 定期趨勢(shì)分析, 并對(duì)環(huán)境菌作鑒定, 建立環(huán)境菌庫。當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差時(shí), 可進(jìn)行相關(guān)的微生物溯源分析。

3.8 儀器設(shè)備

微生物檢測(cè)的主要儀器設(shè)備有滅菌器、超凈臺(tái)、生物安全柜、培養(yǎng)箱等, 定期進(jìn)行性能確認(rèn)和維保, 確保設(shè)備處于良好的工作狀態(tài)。培養(yǎng)溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著直接的影響, 對(duì)培養(yǎng)箱定期進(jìn)行溫度分布驗(yàn)證是*的, 驗(yàn)證的溫度要求應(yīng)與培養(yǎng)的溫度相一致；物品、培養(yǎng)基等的無菌性是通過滅菌設(shè)備的滅菌效果來保證的, 滅菌器性能間接影響著檢測(cè)準(zhǔn)確性。滅菌器性能確認(rèn)除進(jìn)行溫度分布確認(rèn)外, 還需進(jìn)行裝載熱穿透測(cè)試、微生物挑戰(zhàn)性測(cè)試,且當(dāng)用于培養(yǎng)基滅菌時(shí), 應(yīng)進(jìn)行小及大裝載的熱穿透測(cè)試, 確認(rèn)培養(yǎng)基的無菌性和適用性結(jié)果, 以保證培養(yǎng)基的滅菌效果與培養(yǎng)基的性能。故實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的規(guī)范管理, 是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素。

3.9 檢測(cè)方法

微生物檢測(cè)方法與檢測(cè)結(jié)果直接相關(guān), 由于某些供試品具有抑菌活性, 必須對(duì)供試品的抑菌活性及測(cè)定方法的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證, 如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活劑, 除證明其有效性外, 還需證明對(duì)微生物無毒性。當(dāng)檢測(cè)方法發(fā)生變化, 可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果時(shí), 應(yīng)重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。科學(xué)合理的微生物檢測(cè)技術(shù)是提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和檢測(cè)效率的基礎(chǔ)。

4 結(jié)束語

藥品微生物檢測(cè)是保證藥品安全性和可靠性的重要手段, 在藥品生產(chǎn)和使用過程中有著*的作用。本文通過對(duì)藥品微生物檢測(cè)意義以及檢測(cè)特點(diǎn)的簡(jiǎn)單介紹, 引出了影響藥物品檢測(cè)準(zhǔn)確性的主要因素以及相關(guān)的改進(jìn)方法, 希望能夠促進(jìn)藥品微生物檢測(cè)更加、準(zhǔn)確, 并為相關(guān)藥品檢測(cè)工作提供一定的參考。
 

本文來自浙江昌海制藥有限公司 章滿君